蜂膠HPLC指紋圖譜真偽鑒別初探

周 萍  章征天  胡福良  余秀珍

   蜂膠的化學含有復雜，生物學活性廣泛，是近年來國內外蜂產品研究與開發的熱點。我國是蜂膠生產大國，近年來蜂膠產業發展迅猛，出現出口內銷兩旺的勢頭。在這樣的背景下，由于利益的驅動，一些不法商販見機制假售假，特別是以楊樹膠冒充蜂膠的情況比較嚴重。如何提高蜂膠原料的質量，打擊假冒偽劣蜂膠產品，是擺在我們面前嚴峻而緊迫的任務。

    目前，我國的蜂膠質量標準有兩個，分別是商業部的蜂膠標準(標準代號：SB/T10096-92)和農業部的無公害食品蜂膠標準(標準代號：NY/T5136-2002)。但這兩個蜂膠標準均無法鑒別蜂膠與楊樹膠，因為標準中規定的膠含量、總黃酮、氧化指標等項目，楊樹膠均能達到。因此，建立真品蜂膠的HPLC指紋圖譜，用以鑒別蜂膠真偽顯得十分必要和迫切。

    我們從蜂膠的功效含有——黃酮類化合物著手，測定了真品蜂膠、楊樹膠和攙假蜂膠膠的HPLC指紋圖譜，為蜂膠真偽的有效鑒別提供依據。

    1 材料與方法

    蜂膠：真品蜂膠，由杭州天地保健品有限公司實驗蜂場提供。楊樹膠，從市場上購入，經感官檢驗，初步確認。攙假蜂膠，按30%楊樹膠與70%真品蜂膠混合而成。

    試劑：甲醇，HPLC級；H₃PO₄，分析純；乙醇，分析純。

    儀器：LC-10AT VP高效液相色譜儀(日本島津)，UV檢測器，N2000色譜工作站，METERLER電子分析天平(德國梅特勒公司)，超聲波儀，雙重蒸餾水器。

    1.2 方法

    1.2.1 色譜條件

    色譜柱：Hypersil RP-C18(4.6mm×150mm，3μm)

    流動相：甲醇：0.4%H₃PO₄=65:35

    流速：1.0ml/min

    檢測波長：360nm

    進樣量：2μL

    1.2.2 供試品制備

    取蜂膠5g，用20mL95%乙醇超聲溶解，過濾，測定蜂膠固形物，稱取該液適量，使其中含蜂膠固形物20mg，用流動相定容至50ml，混勻，用0.45μm濾膜過濾，上機分析。

    2 結果

    2.1 蜂膠HPLC指紋圖譜的建立

    蜂膠HPLC圖譜以360nm波長檢測色譜信息最為豐富，經多批次樣品重復實驗，歸納出19個峰，作為主要特征峰，組成其指紋圖譜。這19個特征峰的峰號和保留時間見表1。

表1  蜂膠HPLC特征峰峰號和保留時間

    2.2 真品蜂膠與楊樹膠HPLC指紋圖譜分析(圖略)

    楊樹膠、真品蜂膠的指紋圖譜見圖1、圖2。粗看2個圖譜，其主要色譜峰相似度在90%以上，說明兩者在主要含有的組成上非常接近，這也是兩者普通方法難以區別的原因。但仔細觀察可以發現，真品蜂膠含有19個特征峰中的18個特征峰，缺6號峰；楊樹膠含有19個特征峰中的17個特征峰，缺7號和11號峰。通過對10個真品蜂膠和楊樹膠的測定，均有以上特征。特別是7噸峰，其與6號、8號之間的分離度好，是真品蜂膠區別楊樹膠的關鍵依據。

    2.3 攙假蜂膠的辨別(圖略)

    攙假蜂膠的HPLC指紋圖譜見圖3。由圖3可見，攙了楊樹膠的攙假蜂膠，含有6號峰；而7號峰和11號峰的峰面積顯著降低，可以參照真品蜂膠和楊樹膠的指紋圖譜進行判別。

各種蜂膠10個特征峰的相對峰面積RA(以蜂膠總峰面積為分母，樣品中各色譜峰面積為分子，計算得到)見表2。

表2  各種蜂膠7個特征峰的相對峰面積(RA/%)

    攙假蜂膠中，7號峰明顯低于8號和9號峰，提示含量不足；而6號峰呈現，提示攙有楊樹膠。

    3 討論

    黃酮類化合物為蜂膠的主要功效含有，其種類及相對含量分布對于蜂膠的鑒別具有重要意義。根據黃酮類化合物的提取、測定方法，本文建立了蜂膠的HPLC指紋圖譜，反映了蜂膠中黃酮類化合物的分布特征。通過比對真品蜂膠與楊樹膠的HPLC指紋圖譜，特別是6號、7號、11號特征蜂，可以明顯地將兩者區別開來。

    中制劑指紋圖譜已廣泛應用于中制劑質量的控制和鑒別，并有多個標準用于指導生產和加工。蜂膠HPLC指紋圖譜的建立和應用能有效地制止楊樹膠的泛濫。為凈化蜂膠市場提供有力的檢測依據。本項研究還是初步的，更深入、全面的研究有待進一步展開。

                                                             資料來源：蜜蜂雜志2005年第8期