隨著化學制劑使用的增多，蜂蜜中農藥殘留問題越來越受到人們的重視。由于蜂蜜所合成分復雜，為了得到可靠的檢測結果，排除其他成分對目標成分測定時的干擾，必須對樣品進行前處理。近十多年來，為了達到減少樣品處理步驟，提高檢測準確度、降低有毒廢物產生的目的，研究人員研究出了多種樣品預處理方法。這些方法包括：溶劑萃取法(SE)、超臨界流體萃取法(SFE)、固相萃取法(SPE)、基質固相分散法(MSPD)、固相微萃取法(SPME)和攪拌吸附固相萃取法(SBSE)等。本文對目前國外色譜法測定蜂蜜農殘中所采用的預處理方法進行了綜述，并對這些技術的發展趨勢進行了展望。

1 溶劑萃取法(SE)

溶劑萃取法通常分為三步：(1)蜂蜜用水或其他溶劑進行稀釋，如丙酮水溶液、甲醇水溶液等，以獲得均質溶液。(2)根據農藥的極性選擇不同的水不溶性溶劑進行萃取，這些溶劑包括二氯甲烷、乙酸乙酯、苯/異丙醇、正已烷/丙酮、正己烷/冰醋酸、正己烷/2—丙酮等。所選溶劑既要有較好的萃取率又要有良好的選擇性。例如丙酮和正己烷的合用增加了正己烷的極性，提高了分析物的萃取率，但是雜質的種類和濃度也隨之增加，導致難以獲得較好的基線分離條件。研究表明，酸化可以提高萃取的選擇性，用冰醋酸酸化的正已烷萃取蜂蜜中氟胺氰菊酯，可以降低雜質濃度，增加氟胺氰菊酯的萃取率。此外，研究苯菌靈和多菌靈時發現樣品的酸化有益于結果的分析。超聲水浴提取可以提高萃取率。(3)樣品處理后的萃取物要進行洗滌，以便除去可能污染色譜系統的高分子物質，并能減少干擾分析目標峰的雜質含量。

目前已研究出多種樣品預處理方法，如液液分離、C18預處理柱和凝膠色譜柱。溶劑萃取法主要的缺點是溶劑耗量大、耗時長，必須進行樣品處理，并且會產生大量的污染物。

2 超臨界流體萃取法(SPE)

超臨界流體蘋取處理蜂蜜中的農殘具有高效和快速的特點。該法利用超臨界流體特性使得從固體樣品中萃取農殘更加容易。超臨界流體是指處于臨界壓力和臨界溫度之上的物質。CO2是最常用的一種流體，純度高，具有較低的臨界溫度(31℃)和臨界壓力(7.40 MPa)，適合萃取無極性的或者中等極性的混合物。在萃取極性物質時，可以通過添加少量的極性有機溶劑來提高CO2的提取率。與傳統溶劑萃取相比，超臨界流體萃取具有以下優點：(1)萃取速度快(10～60 min)；(2)使用溶劑量少(5～10 mL)；(3)CO2毒、不易燃、不污染環境；⑷選擇萃取時不用另外洗滌；(5)僅需少量樣品(＜10 g)。但該法的缺點是不能直接從水中萃取農藥，因為CO2在水中溶解度很低。在這種情況下，應考慮使用有機改性劑或把樣品進行凍干。另外，處理成本偏高也是該法的一個缺點。

3 固相萃取法(SPE)

固相萃取是利用填克柱中的固體吸附劑吸收液體樣品中的農殘，與樣品的基體和雜質分離，然后利用有機溶劑洗脫。這種方法有以下優點：(1)與溶劑萃取法(SE)相比，萃取時間更短；(2)減少了有毒溶劑的使用；(3)萃取結果不受乳化效果的影響；(4)提供了自動化的可能性。但固相萃取法也有其缺點：①損失大；②精密度不高；③重復性差；④不能大量處理樣品；⑤SPE保護柱通常由塑料制成，會吸附待測成分，降低分析結果的準確性。因此，在萃取前，樣品必須用水、甲醇、甲醇水溶液或乙醇水溶液進行稀釋，使樣品更易通過固相。

在蜂蜜農殘固相萃取中通常使用以下幾種吸附劑：(1)反相C18預柱，常用于萃取殺蟲劑、殺真菌劑、殺螨劑、除草劑、有機氯和有機磷農藥的樣品預處理；(2)硅酸鎂，用于有機氯、有機磷等樣品的萃取；(3)ENV預柱，用于有機氯和有機磷萃取；(4)SCX預柱，用于甲基異丙苯基吡咯樣品的萃取；(5)C8柱，用于氟胺氰戊菊酪的萃取。吸附劑的選擇取決于分析物的極性和可能的雜質。樣品的pH值可能對吸附劑中農藥的保留起重要作用。在某些特定情況下，必須調整樣品的pH值以維持農藥的穩定性，提高其在固相中的吸附率。例如，在強酸條件下，C18柱中硅烷醇殘基不帶電荷，與質子化帶電分析物，如DPMF和甲基異丙苯基吡咯的結合能力被削弱；相反，在堿性條件下，類似氟胺氰菊酪的萃取過程，待測物胺基不帶電荷，與未質子化硅烷醇很難以離子形式結合。另外，pH值在2～10范圍內，雙甲脒的萃取率隨pH值的增加而提高，可能是由于在酸性條件下加速了它的降解；相反，蠅毒磷在堿性環境中不穩定，當pH值增加時，萃取率降低。農藥吸附后，可用有機溶劑洗脫，溶劑可選下列物質之一：丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、正己烷、甲醇、四氫呋喃、正已烷/乙酸乙酪、正已烷/二氯甲烷、甲醇/水、甲醇／乙酸乙酪/二氯甲烷。SPE法使用的吸附劑與農殘的極性直接影響到最適洗脫吸附劑的選擇。比較5PE法和SE法，盡管兩者有相近的萃取率和檢測極限，但SPE法更為精確(＜4％)，干擾更少。

4 基質固相分散法(MSPD)

MSPD法是Barker等在1989年研究成功的一種萃取和凈化技術，這種技術沒有SE法和SPE法萃取固體和半固體樣品時的常見缺點。與SE法相比，萃取時間短，所用溶劑少，而萃取率相近。另外，它省去了使用SPE法萃取必須預先稀釋固體和半固體樣品的步驟。使用基質固相分散法，樣品先與吸附劑(一般為硅酸鎂或C18)混合，然后裝柱。吸附劑有以下幾個功能：(1)充當研磨劑，粉碎樣品；(2)吸附樣品；(3)充當支持劑填柱；（4）分離樣品。最后，用適當的溶劑進行洗脫，所得的萃取物可直接進行分析，雜質(如色素或其他極性化合物)保留在吸附劑上。該法曾成功萃取有機氯、有機磷和殺螨劑等。樣品用甲醇稀釋后，轉移到用硅酸鎂和無水硫酸鈉填充的色譜柱，然后用乙酸乙酪進行洗脫。該法萃取率在60％～113％之間，檢測極限低于0.015 mg/L。

5 固相微萃取(SPME)

SPME法由Pawliszyn等發展形成，該法將取樣和預濃縮合為一體，廣泛應用于有機物分析。使用該法，需要將覆蓋了聚合膜的熔融石英纖維頭浸入樣品中，待樣品中農藥吸附其上，經熱解吸進入氣相色譜柱。SPME法不僅克服了上述SPE法的缺點，還具有以下優點：(1)減少溶劑的影響；(2)減少樣品損失；(3)提取時間縮短到幾分鐘；（4）量程廣，萃取效果好；(5)無需將分析物從液態基體中完全提出；(6)可自動操作。

研究人員對SPME法萃取蜂蜜中殺蠟劑、有機氯、有機磷和有機氮的效果進行了評估，發現影響萃取最重要因素是纖維頭材料的選擇。多數實驗采用聚二甲基硅氧烷(PDMS，100 μm)纖維萃取。此外，也可采用其他材料，如溶膠—凝膠冠醚纖維。這種纖維對于11種有機磷農藥具有良好的萃取效果，相對萃取率可達74％～105％，檢測下限＜0.001 mg/L。

PDMS法還具有以下優點：(1)重現性好；(2)檢測限提高；(3)線性范圍擴大；（4）相關系數增加；(5)提取時間縮短；(6)色譜圖更易分辨。另外，應重視樣品的PH值。研究發現，pH的變化對實驗結果會產生不良的影響。Volante報道，同時測定蠅毒磷和甲基異丙苯基吡咯，氨水的增加可提高甲基異丙苯基口比咯的萃取率，降低蠅毒磷萃取率，可能的原因是口比喃酮可逆開環的水解反應妨礙了SPME纖維的吸附。

6 攪拌吸附固相萃取法（SBSE)

SBSE法是新近研究成功的一種技術，操作原理與SPME法相似，已成功應用于液態食品、生物樣品和環境樣品中有機物的萃取。在該法中，用涂有吸附劑的攪拌子在樣品中攪拌一定時間.待分析物在水相與聚合物中校分配系數達到平衡后，通過熱解吸轉入氣相色譜進樣口，或者脫水后進行高效液相色譜分析。與SPME法相比，SBSE法有更高的萃取率。Blasco等用SBSE法成功地萃取了蜂蜜中的6種有機磷農殘。研究人員比較了SBSE法和SPME法，發現兩者均表現出良好的線性和精確度，但SBSE法更加準確、靈敏，且蜂蜜基質對檢測的影響更小。

7 展望

色譜法測定蜂蜜中農殘的預處理方法有望在以下兩個方面得到突破：(1)攪拌吸附固相萃取法(SBSE)作為最新的農藥萃取方法，有著非常好的應用前景，這方面的研究有望獲得更大的突破；(2)部分通用型分析技術，如MALDI—TOF—MS等技術將在越來越多的實驗室得到利用。目前，有關對農殘鑒定方法進行改進方面的研究不多，這其實是一個很有價值的研究方向。

參考文獻（略）

引自《蜜蜂雜志》2007（4）