摘要：本文主要介紹了指紋圖譜技術在蜂蜜種類識別和蜂蜜活性物質研究中的應用，并提出了我國開展蜂蜜指紋圖譜研究的意義。

關鍵詞：蜂蜜；指紋圖譜；酚酸類化合物；黃酮類化合物；高效液相色譜

1 前言

目前，我國已有檢測真假蜂蜜的國家標準方法，即采用穩定同位素質譜儀測定蜂蜜中的碳-4-植物糖。該法不僅檢測儀器昂貴，而且檢測方法難度較大，很難在企業中推廣應用。近年來國外對蜂蜜的成分研究表明，蜂蜜中存在著微量的生物活性物質。不同的單花蜂蜜，其特征成分存在很大的差異，采用指紋圖譜技術研究不同種類蜂蜜中的微量生物活性物質和非活性物質，可以有效地區分不同蜜源植物來源的蜂蜜，并且可以用于蜂蜜的質量控制中，尤其在鑒別蜂蜜種類、判斷真假蜂蜜中，指紋圖譜技術具有其他方法不可替代的優勢。

2 指紋圖譜的起源與定義

現代“指紋(Fingerprints)”鑒定始于19世紀末20世紀初的犯罪學(criminology)和法醫學。而每一個人的指紋在微小的細節構造上各有不同，這種“唯一性”的指紋則形成了據以鑒別每個人的特征。蜂蜜主要來源于蜜源植物的花蜜，同一蜜源植物由于遺傳性有著整體的相似性，因此，同一種類的單花蜜在成分上也具有相似性。蜜蜂將花蜜采集回來后，通過自身的釀造后，蜂蜜和花蜜只是在糖分組成上發生了變化，而其中的微量成分如源于植物中的次生代謝物一般不會發生較大的變化。這為采用指紋圖譜技術鑒別蜂蜜的種類提供了可能。另外，來源于蜜源植物的花蜜中除了存在植物的次生代謝物，一些植物激素也可能在花蜜中存在，而以淀粉為原料生產的假蜂蜜中不合有植物激素，因此，可以通過測定蜂蜜中的植物激素來鑒別真假蜂蜜，如果該法可靠，只要有一臺普通的液相色譜儀就可以完成。目前，指紋圖譜技術在蜂蜜質量控制的應用尚處于研究階段，在我國還沒有開展這方面的研究工作。

我國是世界蜂蜜生產和出口大國，擁有很多珍貴的特種單花蜜，其中的特有成分至今還尚未研究，應用現代分析技術對蜂蜜中微量化學成分信息以圖形(圖像)的方式進行表征并加以描述，這就是蜂蜜指紋圖譜的內涵。

3 蜂蜜中微量活性成分的色譜檢測技術

蜂蜜中除了含有常規營養成分外，還含有來源于蜜源植物的特有成分。目前已知的成分包括黃酮類化合物、酚酸類化合物、有機酸、脫落酸、芳香物質等，這些物質必須借助色譜技術才能夠準確測定。

3.1 黃酮類化合物

蜂蜜中的黃酮可能來源于植物、花粉和蜂膠，其中主要以貳元形式存在，原因是植物的花蜜經蜜蜂釀制后，糖基部分被蜜蜂體內的酶水解掉了。西班牙科學家Federico等采用XAD-2型樹脂吸附，借助SePhadex LH-20凝膠層析，反相液相色譜儀分離技術，從LaAlcaDia地區的蜂蜜中分離出了16種黃酮類化合物，含量較多的有槲皮素，坎菲醇，3-甲氧基-坎菲醇，異鼠李素，柯因，3，3’-二甲氧基-槲皮素，高良姜素，芹菜素，生松素，生松素醇等。該研究沒有報道蜂蜜的種類。

該研究小組還發現，柑桔蜜中存在有橙皮素，而其他種類的蜂蜜中尚未檢測出該物質。Isabel等采用色譜技術從澳大利亞產的小校樹蜜中鑒定出了多種黃酮類化合物，雖然楊梅酮，五羥黃酮，槲皮素，坎菲醇，毛地黃黃酮存在所有被檢測的桉樹蜜樣品中，但是，五羥黃酮主要存在于一種叫Eucalyptus camaldulensis的桉樹蜜中，毛地黃黃酮主要存在于Eucalyptus pilligaensis桉樹蜜中，兩種黃酮分別可以作為不同種類桉樹蜜的黃酮類化合物的標記物。Isabel等人比較了不同產地的迷迭香蜂蜜中的黃酮類化合物，發現產自突尼斯的迷迭香蜂蜜只含有8-甲氧基-坎菲醇和坎菲醇，而產自西班牙的迷迭香蜂蜜中含有10種以上的黃酮類化合物，其中8-甲氧基-坎菲醇和坎菲醇的含量與突尼斯產的迷迭香蜂蜜相同，因此，這兩種化合物可以作為迷迭香蜂蜜的標記化合物。隨著對蜂蜜中黃酮類化合物研究的不斷深入，許多單花蜜中的黃酮類化合物被檢測出來，由于每一種蜂蜜來自不同的蜜源植物，其成分存在一定的差異，正是這種差異，為蜂蜜指紋圖譜的建立和應用提供了可能。當然，建立每一種蜂蜜黃酮類化合物的指紋圖譜需要做大量的工作，尤其是樣品的采集非常重要。

3.2 酚酸類化合物

酚酸類化合物是廣泛存在于自然界的一類有機化合物，按照其結構可分為多酚和單酚。其中單酚中的酚酸類化合物廣泛存在于蜂蜜中。近年來研究表明，酚酸具有抗病毒、抗菌、提高機體免疫功能、抗氧化、抗炎癥等多種功能，因此越來越引起人們的關注。蜂蜜中的酚酸主要來源于蜜源植物的花蜜、花粉和蜂膠，不同種類的蜂蜜其酚酸組成也不相同。Yao等人研究表明，產自澳大利亞的金娘科桃金娘屬(Leptospennum)一種植物的蜂蜜中主要含有沒食子酸和香豆酸，另外還含有大量鞣花酸和氯原酸。新西蘭產的麥盧卡蜜(也屬于金娘科桃金娘屬植物的一種)中苯甲酸含量最高，達到14.0mg／100g，但是苯甲酸不屬于酚酸，而含量最高的酚酸仍然是沒食子酸，香豆酸含量較低。因此，沒食子酸和香豆酸均是上述兩類蜂蜜的植物標記物，只是前者的香豆酸含量高于后者，但沒食子酸含量低于后者，這也是二者的主要區別。Roderick等人在研究新西蘭和北愛爾蘭產的蜂蜜時發現，不同種類的蜂蜜其酚酸的色譜圖存在很大的差異，同類蜂蜜(麥盧卡蜜)的色譜圖則具有很多相似性。葡萄蜜中主要含有丁香酸，苜蓿草蜜和石南花蜜主要含有苯甲酸和香草酸，這些成分均是構建單花蜜指紋圖譜的基礎。

近年來，在研究蜂蜜中的微量成分時采用了毛細管電泳技術，該法能夠精確分離蜂蜜中的各種酚類化合物，Andrade等采用毛細管電泳技術從11個蜂蜜樣品中分離出了27種酚類化合物，發現不同種類的蜂蜜其酚類化合物組成存在很大的差異，迷迭香酸是百里香蜜的特征物質，4，5，7-三羥烷酮是薰衣草蜜的特征成分，橙皮素是柑桔蜜的特征成分，而鞣花酸主要存在于石南蜜中。另外，石南蜜中還含有相當數量的咖啡酸苯乙酯化合物。這些研究雖然很具有前景，但是需要大量的實驗數據來驗證該結果用于區分單花蜜的可靠性。

4 小結

蜜蜂在一個花季采集花蜜時，可能采集到兩種以上的花蜜，如何建立百花蜜的指紋圖譜國外已有一些探索性的研究。我國擁有豐富的蜜源植物，大宗單花商品蜂蜜就多達50多種，其中許多單花蜜具有地域特色，屬我國特有的蜂蜜，但是我們對其中含有活性成分的構成知之甚少，許多工作有待我們深入系統的研究，最終讓我們能夠了解蜂蜜的真正內涵，使之更好地為人類的健康服務。

參考文獻（略）

引自《中國蜂業》2006（3）